Trombopoyetina

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    11-Jul-2015

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Trombopoyetina (TPO) Fecha 01/01/1996 Publicado por primera vez en I + D Sistemas de Catlogo "de 1996. Informacin general Trombopoyetina (TPO) es un factor que estimula el desarrollo de los precursores de los megacariocitos de las plaquetas, lo que lleva a un aumento en el nmero de plaquetas circulantes de una manera que es anloga a la eritropoyetina (EPO) la estimulacin de los precursores eritroides. La existencia de un factor se demostr hace 35 aos mediante la inyeccin de suero de ratas de agotamiento de las plaquetas en ratas normales, las ratas receptoras respondi con un aumento del nmero de plaquetas circulantes. 1 Un intento largo y tedioso para obtener la trombopoyetina (revisado en ref. 2) llev a la clonacin del ligando MPL en 1994 por cinco grupos 3-7 independientes. El ligando MPL es generalmente aceptado como la trombopoyetina (revisado en ref. 8). MPL (el receptor de la trombopoyetina) fue descubierto como el producto del gen c- mpl , el homlogo normal del oncogen v- MPL , el gen transformador de un virus de la leucemia murina mieloproliferativos. 9,10 oligonucletidos antisentido de c- mpl inhibido de colonias la capacidad de formacin de los progenitores de megacariocitos 11 , y "knockout" ratones deficientes en el c- mplhaba una reduccin del 85% de las plaquetas circulantes 12 El receptor Mpl result ser la clave para la identificacin y clonacin de la trombopoyetina. 3-7

Informacin estructural Tpo humano maduro, obtenido a partir del producto de traduccin primario por escisin de un pptido seal de 21 residuos, es un cido amino-332 (bis) los residuos del polipptido. 3,8,13 Se compone de al menos dos regiones. La porcin N-terminal (alrededor de 154 residuos de aa) tiene homologa de secuencia y estructura general con Epo. Hay un 23% de identidad de secuencia, con una cantidad igual de sustitucin conservadora. Las dos cistenas esenciales de la EPO se conservan en TPO, y los dos factores tienen un distribucin similar de las cuatro regiones alfa helicoidal de citocinas hematopoyticas. Hay un alto grado de homologa (> 70%) entre las OPC humanos, porcinos, caninos, murino y la rata. La homologa es mayor en el N-terminal (Epo-como) la regin de la regin C-terminal

de la molcula. La parte C-terminal de TPO no tiene similitud de secuencia con otras protenas conocidas. La masa de Tpo predecir a partir de la secuencia es de aproximadamente 35 kDa, pero las masas inform de mediciones de los materiales en el suero o en el lquido de cultivo de clulas recombinantes varan desde 18 hasta 70 kDa. Esto ha llevado a las sugerencias de 8,13 que TPO es altamente glicosilada y que es susceptible de procesamiento proteoltico. Hay evidencia de la plausibilidad de cada una de estas sugerencias. En primer lugar, hay seis potencial de N-glicosilacin sitios vinculados en la mitad Cterminal de TPO. En segundo lugar, hay dos Arg-Arg motivos que son los posibles sitios de procesamiento proteoltico. La primera (en los residuos 153 y 154) es justo despus de la Epo-como el dominio Nterminal, y la segunda (en los residuos 245 y 246) es la mitad del camino a travs del dominio C-terminal. Receptor Como se mencion anteriormente, el receptor de TPO es el protooncogen c-MPL, un homlogo de una protena de la envoltura del virus de la leucemia mieloproliferativos. 9,10 Las formas humanas y murinas de los receptores se han clonado y secuenciado y mostrar aproximadamente el 81% de identidad a nivel de secuencia de aminocidos. 9,10,14 dos las fuentes humanas y murinas muestran la presencia de mltiples formas de receptor Mpl producido como consecuencia del empalme del ARNm alternativos, incluyendo formas aparentemente soluble que carecen de dominios transmembrana y citoplasmtica. 9, 10,14 Los receptores Mpl humanos y murinos muestran las secuencias conservadas y caracterstico organizacin estructural de los miembros de la superfamilia de receptores de citoquinas hematopoyetina. 15,16 No secuencia de consenso para la actividad quinasa se encuentra en dominio citoplsmico de estos receptores. 9 El intracelular dominio del receptor Mpl se ha encontrado que constan de dos dominios distintos que interactan con las diferentes vas de transduccin de seales. Un dominio es necesaria para la induccin de la fosforilacin de Shc y c- fos la sntesis de ARNm que indica la implicacin de la va de transduccin de seal Ras. 17 Un dominio citoplsmico por separado tiene que ver con la activacin de la quinasa JAK2 y la posterior activacin de la protena STAT. Al parecer, los informes contradictorios sugieren que puede ser una estadstica-5 como la protena de 18 o STAT1 y STAT3 17 son las protenas STAT particulares del caso. Efectos Biolgicos Identificacin de los tipos de clulas que expresan el receptor de la TPO (MPL) dan una pista a la accin de TPO. Expresin de la cmpl gen ha sido detectado por la reaccin en cadena de la polimerasa de transcripcin (RT-PCR) en pluripotentes clulas madre hematopoyticas (CD34 + CD38- ), pero entre las lneas de clulas de linaje cometido o clulas maduras su expresin se detecta slo en clulas de la lnea megacarioctica. 11 Los estudios de

inmunofluorescencia por citometra de flujo dar general que confirma los resultados. 19 En una poblacin de total de las clulas hematopoyticas, MPL se detecta en muy pocos, y la mayora de ellos son del linaje megakayocytic, con los ms brillantes manchas en megacariocitos poliploides . Trata de mostrar que las clulas madre pluripotentes expresado Mpl no han tenido xito, aumentando la posibilidad de que la RT-PCR experimentos detectar la expresin de c- mpl en slo un pocos progenitores de megacariocitos en la poblacin de clulas madre primitivas. Este es un punto importante debido a su relevancia para la cuestin de si Tpo actos para inducir la diferenciacin en el linaje de los megacariocitos. Con las clulas murinas, un AA4 + / Sca - de la poblacin, que es capaz de largo plazo la reconstitucin de los ratones irradiados letalmente (y por lo tanto es pluripotentes), es del 50% Mpl + , el apoyo a la idea de que MPL se expresa en las clulas madre primitivas. 20 Definicin de la actividad del trombopoytico Tpo es difcil debido a las mltiples citocinas sabe que en general hematopoyticas, incluyendo la actividad trombopoytico,. Investigacin en esta rea fue estudiada recientemente por Kaushansky veintin Las citoquinas trombopoytico importantes son factor de clulas madre (SCF), IL-3 IL-6 e IL-11. La pregunta es, donde en la secuencia de la proliferacin de las clulas madre para diferenciarse en lneas celulares comprometidos con la maduracin en las plaquetas maduras se Tpo ejercer su efecto y hay una sinergia con las citoquinas trombopoytico otros? Las clulas madre multipotentes se diferencia en una clula se comprometi a que asume las propiedades de un megacariocito y comienza con la ploida del aumento de la endocitosis de 32 a 64, finalmente, la fragmentacin en las plaquetas. Tpo aparentemente afecta a todo este proceso trombopoytico 8,19-21 , con un efecto ms fuerte en las ltimas etapas. Tanto el nmero de los megacariocitos, y sus ploida, son mayores en los cultivos con TPO que con cualquiera de SCF o IL-3, IL-6 o IL-11. De hecho, las altas concentraciones de IL-6 o IL-11 en combinacin con altas concentraciones de SCF o IL-3 tenan que acercarse a la actividad de TPO solo. 8,21 Adems, la maduracin completa de los megacariocitos con la formacin de plaquetas slo se observa en la presencia de Tpo. 8 Inters clnico El inters clnico evidente es en el posible uso de protenas recombinantes para el tratamiento de estados Tpo trombocitopnica producida por patologas o tratamientos teraputicos, tales como la irradiacin.

Abstracto Trombopoytico (TPO) y estimulante de colonias de megacariocitos (Meg-CSF) las actividades se encuentran en los extractos orina de pacientes con anemia aplsica.Extracciones de preparacin bioqumicos se llevaron a cabo utilizando Sephadex G-50 y DEAE-celulosa cromatografa en columna. La actividad biolgica de estos extractos fueron evaluados utilizando no slo un ensayo in vivo, pero tambin se examinaron in vitro empleando el desarrollo clonal de las colonias de megacariocitos. Tanto in vivo, as como in vitro, las actividades biolgicas se han detectado en la fraccin de lote que fue paso a paso eluido de DEAE-celulosa entre 0,022 M de NaCl en 0.016 M de NaH2PO4 y NaCl 0,15 M en 0,05 M Na2HPO4 como una sola fraccin. Cuando 0,4 mg de esta fraccin se inyecta todos los das en ratas, se produjo una marcada trombopoyesis produciendo un aumento del 40% con respecto a los recuentos de plaquetas inicial de 3 das despus de la administracin. Esto fue seguido por una disminucin de las plaquetas a una serie subnormal por 21 das despus de la inyeccin. La concentracin de hemoglobina ha aumentado gradualmente desde un 5% por encima del valor inicial de los das 7 a 20% por encima del valor inicial de 21 das. El efecto de la neuraminidasa (Nase) de las propiedades de dicho extracto tambin fue examinado. Nase tratados con los extractos, similar a los extractos nativos descrito anteriormente mantuvo la actividad de TPO. Los cambios en el nmero de los megacariocitos en el bazo y la mdula sea de ratas se analizaron tanto con el extracto de Nase tratados, as como con el extracto nativo. Un notable incremento en el nmero de megacariocitos, tres veces por encima de la cuenta normal, se encontr en el bazo de ratas tratadas con la preparacin del extracto nativo, por el contrario, sin embargo, no se observaron cambios en el nmero de megacariocitos esplnico en ratas que recibieron el extracto Nase tratos. Por otro lado, Nase tratados con extracto conservado su capacidad de estimular la mdula sea la proliferacin de megacariocitos en la misma rata. El extracto de orina revel tambin in vitro Meg-CSF actividad con una actividad especfica de 31, 750 CFU-Meg colonias / mg de protena.