Trombopoyetina

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    11-Jul-2015

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Trombopoyetina (TPO) Fecha 01/01/1996 Publicado por primera vez en I + D Sistemas de Catálogo "de 1996. Información general Trombopoyetina (TPO) es un factor que estimula el desarrollo de los precursores de los megacariocitos de las plaquetas, lo que lleva a un aumento en el número de plaquetas circulantes de una manera que es análoga a la eritropoyetina (EPO) la estimulación de los precursores eritroides. La existencia de un factor se demostró hace 35 años mediante la inyección de suero de ratas de agotamiento de las plaquetas en ratas normales, las ratas receptoras respondió con un aumento del número de plaquetas circulantes. 1 Un intento largo y tedioso para obtener la trombopoyetina (revisado en ref. 2) llevó a la clonación del ligando MPL en 1994 por cinco grupos 3-7 independientes. El ligando MPL es generalmente aceptado como la trombopoyetina (revisado en ref. 8). MPL (el receptor de la trombopoyetina) fue descubierto como el producto del gen c- mpl , el homólogo normal del oncogen v- MPL , el gen transformador de un virus de la leucemia murina mieloproliferativos. 9,10 oligonucleótidos antisentido de c- mpl inhibido de colonias la capacidad de formación de los progenitores de megacariocitos 11 , y "knockout" ratones deficientes en el c- mplhabía una reducción del 85% de las plaquetas circulantes 12 El receptor Mpl resultó ser la clave para la identificación y clonación de la trombopoyetina. 3-7 Información estructural Tpo humano maduro, obtenido a partir del producto de traducción primario por escisión de un péptido señal de 21 residuos, es un ácido amino-332 (bis) los residuos del polipéptido. 3,8,13 Se compone de al menos dos regiones. La porción N-terminal (alrededor de 154 residuos de aa) tiene homología de secuencia y estructura general con Epo. Hay un 23% de identidad de secuencia, con una cantidad igual de sustitución conservadora. Las dos cisteínas esenciales de la EPO se conservan en TPO, y los dos factores tienen un distribución similar de las cuatro regiones alfa helicoidal de citocinas hematopoyéticas. Hay un alto grado de homología (> 70%) entre las OPC humanos, porcinos, caninos, murino y la rata. La homología es mayor en el N-terminal (Epo-como) la región de la región C-terminal de la molécula. La parte C-terminal de TPO no tiene similitud de secuencia con otras proteínas conocidas. La masa de Tpo predecir a partir de la secuencia es de aproximadamente 35 kDa, pero las masas informó de mediciones de los materiales en el suero o en el líquido de cultivo de células recombinantes varían desde 18 hasta 70 kDa. Esto ha llevado a las sugerencias de 8,13 que TPO es altamente glicosilada y que es susceptible de procesamiento proteolítico. Hay evidencia de la plausibilidad de cada una de estas sugerencias. En primer lugar, hay seis potencial de N-glicosilación sitios vinculados en la mitad Cterminal de TPO. En segundo lugar, hay dos Arg-Arg motivos que son los posibles sitios de procesamiento proteolítico. La primera (en los residuos 153 y 154) es justo después de la Epo-como el dominio Nterminal, y la segunda (en los residuos 245 y 246) es la mitad del camino a través del dominio C-terminal. Receptor Como se mencionó anteriormente, el receptor de TPO es el protooncogen c-MPL, un homólogo de una proteína de la envoltura del virus de la leucemia mieloproliferativos. 9,10 Las formas humanas y murinas de los receptores se han clonado y secuenciado y mostrar aproximadamente el 81% de identidad a nivel de secuencia de aminoácidos. 9,10,14 dos las fuentes humanas y murinas muestran la presencia de múltiples formas de receptor Mpl producido como consecuencia del empalme del ARNm alternativos, incluyendo formas aparentemente soluble que carecen de dominios transmembrana y citoplasmática. 9, 10,14 Los receptores Mpl humanos y murinos muestran las secuencias conservadas y característico organización estructural de los miembros de la superfamilia de receptores de citoquinas hematopoyetina. 15,16 No secuencia de consenso para la actividad quinasa se encuentra en dominio citoplásmico de estos receptores. 9 El intracelular dominio del receptor Mpl se ha encontrado que constan de dos dominios distintos que interactúan con las diferentes vías de transducción de señales. Un dominio es necesaria para la inducción de la fosforilación de Shc y c- fos la síntesis de ARNm que indica la implicación de la vía de transducción de señal Ras. 17 Un dominio citoplásmico por separado tiene que ver con la activación de la quinasa JAK2 y la posterior activación de la proteína STAT. Al parecer, los informes contradictorios sugieren que puede ser una estadística-5 como la proteína de 18 o STAT1 y STAT3 17 son las proteínas STAT particulares del caso. Efectos Biológicos Identificación de los tipos de células que expresan el receptor de la TPO (MPL) dan una pista a la acción de TPO. Expresión de la cmpl gen ha sido detectado por la reacción en cadena de la polimerasa de transcripción (RT-PCR) en pluripotentes células madre hematopoyéticas (CD34 + CD38- ), pero entre las líneas de células de linaje cometido o células maduras su expresión se detecta sólo en células de la línea megacariocítica. 11 Los estudios de inmunofluorescencia por citometría de flujo dar general que confirma los resultados. 19 En una población de total de las células hematopoyéticas, MPL se detecta en muy pocos, y la mayoría de ellos son del linaje megakayocytic, con los más brillantes manchas en megacariocitos poliploides . Trata de mostrar que las células madre pluripotentes expresado Mpl no han tenido éxito, aumentando la posibilidad de que la RT-PCR experimentos detectar la expresión de c- mpl en sólo un pocos progenitores de megacariocitos en la población de células madre primitivas. Este es un punto importante debido a su relevancia para la cuestión de si Tpo actos para inducir la diferenciación en el linaje de los megacariocitos. Con las células murinas, un AA4 + / Sca - de la población, que es capaz de largo plazo la reconstitución de los ratones irradiados letalmente (y por lo tanto es pluripotentes), es del 50% Mpl + , el apoyo a la idea de que MPL se expresa en las células madre primitivas. 20 Definición de la actividad del trombopoyético Tpo es difícil debido a las múltiples citocinas sabe que en general hematopoyéticas, incluyendo la actividad trombopoyético,. Investigación en esta área fue estudiada recientemente por Kaushansky veintiún Las citoquinas trombopoyético importantes son factor de células madre (SCF), IL-3 IL-6 e IL-11. La pregunta es, donde en la secuencia de la proliferación de las células madre para diferenciarse en líneas celulares comprometidos con la maduración en las plaquetas maduras se Tpo ejercer su efecto y hay una sinergia con las citoquinas trombopoyético otros? Las células madre multipotentes se diferencia en una célula se comprometió a que asume las propiedades de un megacariocito y comienza con la ploidía del aumento de la endocitosis de 32 a 64, finalmente, la fragmentación en las plaquetas. Tpo aparentemente afecta a todo este proceso trombopoyético 8,19-21 , con un efecto más fuerte en las últimas etapas. Tanto el número de los megacariocitos, y sus ploidía, son mayores en los cultivos con TPO que con cualquiera de SCF o IL-3, IL-6 o IL-11. De hecho, las altas concentraciones de IL-6 o IL-11 en combinación con altas concentraciones de SCF o IL-3 tenían que acercarse a la actividad de TPO solo. 8,21 Además, la maduración completa de los megacariocitos con la formación de plaquetas sólo se observa en la presencia de Tpo. 8 Interés clínico El interés clínico evidente es en el posible uso de proteínas recombinantes para el tratamiento de estados Tpo trombocitopénica producida por patologías o tratamientos terapéuticos, tales como la irradiación. Abstracto Trombopoyético (TPO) y estimulante de colonias de megacariocitos (Meg-CSF) las actividades se encuentran en los extractos orina de pacientes con anemia aplásica.Extracciones de preparación bioquímicos se llevaron a cabo utilizando Sephadex G-50 y DEAE-celulosa cromatografía en columna. La actividad biológica de estos extractos fueron evaluados utilizando no sólo un ensayo in vivo, pero también se examinaron in vitro empleando el desarrollo clonal de las colonias de megacariocitos. Tanto in vivo, así como in vitro, las actividades biológicas se han detectado en la fracción de lote que fue paso a paso eluido de DEAE-celulosa entre 0,022 M de NaCl en 0.016 M de NaH2PO4 y NaCl 0,15 M en 0,05 M Na2HPO4 como una sola fracción. Cuando 0,4 mg de esta fracción se inyecta todos los días en ratas, se produjo una marcada trombopoyesis produciendo un aumento del 40% con respecto a los recuentos de plaquetas inicial de 3 días después de la administración. Esto fue seguido por una disminución de las plaquetas a una serie subnormal por 21 días después de la inyección. La concentración de hemoglobina ha aumentado gradualmente desde un 5% por encima del valor inicial de los días 7 a 20% por encima del valor inicial de 21 días. El efecto de la neuraminidasa (Nase) de las propiedades de dicho extracto también fue examinado. Nase tratados con los extractos, similar a los extractos nativos descrito anteriormente mantuvo la actividad de TPO. Los cambios en el número de los megacariocitos en el bazo y la médula ósea de ratas se analizaron tanto con el extracto de Nase tratados, así como con el extracto nativo. Un notable incremento en el número de megacariocitos, tres veces por encima de la cuenta normal, se encontró en el bazo de ratas tratadas con la preparación del extracto nativo, por el contrario, sin embargo, no se observaron cambios en el número de megacariocitos esplénico en ratas que recibieron el extracto Nase tratos. Por otro lado, Nase tratados con extracto conservado su capacidad de estimular la médula ósea la proliferación de megacariocitos en la misma rata. El extracto de orina reveló también in vitro Meg-CSF actividad con una actividad específica de 31, 750 CFU-Meg colonias / mg de proteína.