Esp. Graciela Rodriguez JTP. Curso Parasitologa. UNSL.

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    11-Apr-2015

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Diapositiva 1 Esp. Graciela Rodriguez JTP. Curso Parasitologa. UNSL. Diapositiva 2 Recoleccin de muestras de materia fecal. En fresco. Con conservantes. Procesamiento de muestras fecales. Tcnicas de concentracin: Sedimentacin: -Carles-Barthelemy. -Teleman modificado. Flotacin: -Mtodo de Willis. -Mtodo de Sheather. -Mtodo de Faust. Diapositiva 3 Recoleccin de materia fecal para exmen directo o fresco: Permite observar trofozotos mviles. Observar dentro de los 30 minutos de emitida. Muestra de materia fecal del tamao de una cucharadita de caf en recipiente limpio. Evitar contaminacin con orina En pacientes que usen paales tomar la muestra de las nalgas, nunca del paal. Diapositiva 4 Recoleccin de materia fecal en conservantes: Se usa cuando: -No se puede procesar dentro de los 30 minutos. -Facilitar el transporte. -Conservar varios meses. Muestra de materia fecal recin emitida en recipiente con solucin conservante. Evitar contaminacin con orina. ( 1 porcin de materia fecal en 3 volmenes de solucin conservante) Diapositiva 5 Conservantes para muestras fecales ConservanteVentajasDesventajas Solucin salina formolada (5 o 10 %) -Fcil preparacin -Larga duracin -Buen preservante para quistes de protozoarios, larvas y huevos de helmintos -Inapropiado para preservar trofozotos de protozoarios -No apropiado para algunas coloraciones permanentes MIF ( Merthiolate iodo formaldhedo) -Fcil preparacin -Larga duracin -Fija y colorea los organismos -Inapropiado para coloracin permanente con tcnica tricrmica -No conserva morfologa de trofozotos -El iodo distorsiona protozoarios SAF (Acetato de sodio cido actico formaldhedo) -Fcil preparacin -Larga duracin -Apropiado para coloraciones cido alcohol resistentes -Requiere aditivos (albmina- glicerina) para la adhesin de las muestras al portaobjetos -Coloraciones permanentes no tan buenas como con PVA PVA (Alcohol polivinlico) -Buen preservante para trofozotos y quistes de protozoarios. Tipificacin de amebas. -Fcil preparacin de preparados para coloraciones permanentes (preserva y fija) -Inadecuada preservacin de morfologa de huevos de helmintos, larvas, coccidios y microsporidios -Contiene cloruro mercrico -Difcil preparacin Solucin de dicromato de potasio -til para estudio de coccidios -Apropiado para esporulacin -Impide crecimiento bacteriano -No es fijador Diapositiva 6 Muestra nica: en pacientes hospitalizados Muestra seriada: - En el lapso de 7 das, no mayor de 15 das, recoger una pequea porcin de cada deposicin espontanea (mnimo 6 muestras). Mezclar con la solucin conservadora. ( De esta manera se evitan las fases negativas de las parasitosis). - Evitar ingesta de bismuto, antidiarreicos no absorbibles, aceites minerales, soluciones de contraste para radiografas (interfieren en la deteccin) Diapositiva 7 Muestras recolectadas en fresco: - Examen macroscpico: consistencia (slidas, semislidas, pastosas, lquidas), olor, color, sangre, moco, progltides, parsitos adultos, etc. - Examen microscpico de trofozotos mviles entre porta y cubreobjetos. Diapositiva 8 Fase previa en los mtodos de concentracin: Homogeneizacin y filtracin FILTRADO A Diapositiva 9 Mtodos de sedimentacin- centrifugacin: Teleman modificado. Carles-Barthelemy. Mtodos de flotacin- centrifugacin: Mtodo de Willis. Mtodo de Faust. Mtodo de Sheather. Diapositiva 10 Procedimiento: 1. Homogenizar con varilla de vidrio las heces fijadas en solucin formolada. 2. Filtrar a travs de un embudo con una doble gasa en tubo de centrfuga. 3. Agregar 2 ml de ter. 4. Centrifugar a 1000-1500 rpm durante 3-5 minutos. 5. Eliminar con golpe seco el sobrenadante. 6. Tomar con pipeta pasteur una pequea cantidad del sedimento y colocar en portaobjetos. 7. Agregar una gota de lugol y sellar con un cubreobjeto. Mtodo de Teleman modificado Diapositiva 11 3 a 5 min 1000-1500 rpm Volcar sobrenadante ter sulfrico Lugol 100x / 400x 2 ml Lq. A Sol. salina formolada (densidad 1,010) Diapositiva 12 Procedimiento: 1. Homogenizar con varilla de vidrio las heces fijadas en solucin formolada. 2. Filtrar a travs de un embudo con una doble gasa en tubo de centrfuga. 3. Centrifugar 2 a 3 minutos a 2000 rpm. 4. Volcar sobrenadante. Disolver sedimento en solucin B. Agitar. Agregar 2 a 3 ml de ter sulfrico. Agitar fuertemente. Reposar 5. Centrifugar 2 minutos a 1500 rpm. 6. Romper el anillo (capa ter) con varilla de vidrio. Evitar que se mezcle con el sedimento. 7. Centrifugar 2 minutos a 1500 rpm. 8. Observar sedimento. Mtodo de Carles-Barthelemy Diapositiva 13 Lq. A Sol. salina formolada Diluir 2 a 3 min 2000 rpm Volcar sobrenadante ter sulfrico Lq. B: Sol. de cido ctrico, formolada (Densidad: 1.047) 2 a 3 cc Agitar 1 min 1000 rpm Tirar Sob. Lugol 100x / 400x Densidad 1,050-1,150 Diapositiva 14 Procedimiento: 1. Colocar en el frasco una muestra de materia fecal del tamao de un garbanzo. 2. Agregar solucin salina sobresaturada. Mezclar. 3. Colocar un portaobjetos sobre el borde superior del frasco y completar con la misma solucin hasta que la pelcula superficial haga contacto con el portaobjetos. 4. Dejar la solucin 10 minutos a 1 hora ( 20 minutos). 5. Levantar rpida y verticalmente el portaobjetos, invirtindolo y colocar un cubreobjetos. 6. Observar al microscopio con bajo aumento. Mtodo de Willis Diapositiva 15 FILTRADO Solucin NaCl (densidad 1,200) Homogeneizar 30 a 45 min Lugol 100x / 400x Diapositiva 16 Procedimiento: 1. Homogenizar con varilla de vidrio las heces fijadas en solucin formolada. 2. Filtrar a travs de un embudo con una doble gasa en tubo de centrfuga. 3. Centrifugar 2 minuto a 2000 rpm. 4. Volcar el sobrenadante 5. Disolver el sedimento en agua destilada 6. Centrifugar 2 minuto a 2000 rpm. Repetir hasta que el sobrenadante quede lmpido. 7. Volcar el sobrenadante. Agregar al sedimento 3 a 4 ml de solucin sulfato de cinc al 33% 8. Centrifuar 2 minutos a 2000 rpm. 9. Tomar con pipeta pasteur o ansa el material que flota. 10. Observar al microscopio. Mtodo de Faust Diapositiva 17 2 a 3 min 2000 rpm Volcar sobrenadante Solucin de ZnSO 4 (33%) (d: 1,180) Gota de Lugol 100x / 400x Filtrado H2OH2O 2 a 3 min 2000 rpm Sacar de la superficie con ansa Diapositiva 18 Procedimiento: 1. Homogenizar con varilla de vidrio las heces fijadas en solucin formolada. 2. Filtrar a travs de un embudo con una doble gasa en tubo de centrfuga. 3. Agregar 2 ml de ter. 4. Centrifugar 3 a 5 minutos a 1000-1500 rpm. 5. Eliminar con golpe seco el sobrenadante. 6. Tomar una parte del sedimento y resuspenderlo en 1 ml de solucin de azcar. 7. Dejar reposar 3 minutos. 8. Tomar una muestra de la superficie de la solucin con pipeta pasteur y colocar en portaobjetos. 9. Observar al microscopio. Mtodo de Sheather Los ooquistes de Cryptosporidium spp se observan de color rosado y las levaduras de color verdoso. Diapositiva 19 Mtodo de Sheather 3 a 5 min 1000-1500 rpm Volcar sobrenadante ter sulfrico Lugol 100x / 400x 2 ml Solucin de sheather (sacarosa- fenol- H2O d) 1 ml Reposar 3 minutos Tomar con pipeta pasteur de la superficie Diapositiva 20 A)- Utilizacin de guantes protectores y ropa protectora cuando se procesan las muestras. B)- Usar cabinas de bioseguridad si es necesario. C)- Descontaminar la superficie de trabajo al comienzo y final del procesamiento de las muestras. D)- No beber, no fumar, no comer o manipular lentes de contacto en el rea de trabajo. E)- Al retirarse los guantes lavarse las manos. A)- Utilizacin de guantes protectores y ropa protectora cuando se procesan las muestras. B)- Usar cabinas de bioseguridad si es necesario. C)- Descontaminar la superficie de trabajo al comienzo y final del procesamiento de las muestras. D)- No beber, no fumar, no comer o manipular lentes de contacto en el rea de trabajo. E)- Al retirarse los guantes lavarse las manos. Diapositiva 21 UN BUEN DIAGNSTICO DE LABORATORIO COMIENZA CON UNA BUENA MUESTRA Y UNA BUENA MUESTRA COMIENZA CON UNA BUENA EXPLICACIN Y UNA BUENA EXPLICACIN TERMINA CUANDO NOS HEMOS ASEGURADO QUE EL PACIENTE NOS COMPRENDI

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